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          淀粉分支酶（SBE）測(cè)定試劑盒 微量法

測(cè)定意義：SBE（EC 2.4.1.18）主要存在于植物中，是參與支鏈淀粉合成的關(guān)鍵酶，測(cè)定SBE活性在淀粉生物合成、農(nóng)作物品種選育和品質(zhì)遺傳改良研究中具有重要意義

測(cè)定原理：淀粉和碘結(jié)合后在660nm有特征光吸收，SBE可切斷支鏈淀粉側(cè)支，從而降低了淀粉-碘復(fù)合物在660nm吸收值，一定時(shí)間內(nèi)吸光度下降的百分率可以反映SBE活性。

需要的儀器，耗材:可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水。

 淀粉分支酶（SBE）測(cè)定試劑盒 微量法

一、粗酶液提取按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。二、測(cè)定步驟試劑名稱（μL） 對(duì)照管 測(cè)定管 95℃水浴 1min 后滅活的粗酶液 250 粗酶液 250 試劑一 320 320 試劑二 30 30 混勻，37℃準(zhǔn)確保溫 20 min，95℃水浴 1 min（蓋緊防止水分散失），冷卻試劑三 500 500 試劑四 40 40 混勻，室溫靜置 10min，用蒸餾水調(diào)零，660nm 處讀取各管吸光值。，注意： 1、 可以在不同對(duì)照管中加入不同樣品的粗酶液，然后集中進(jìn)行 1min95℃水浴處理。 2、 試劑一如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混勻。

1、按照蛋白濃度計(jì)算單位的定義：以波長(zhǎng) 660nm 的吸光度下降百分率表示，每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每降低 1％碘藍(lán)值為一個(gè)酶活性單位。 SBE 活性(U/mg prot)=( A 對(duì)照管-A 測(cè)定管)/A 對(duì)照管÷Cpr ×100 2、按照樣本鮮重計(jì)算單位的定義：以波長(zhǎng) 660nm 的吸光度下降百分率表示，每 g 組織在反應(yīng)體系中每降低 1％碘藍(lán)值為一個(gè)酶活性單位。 SBE 活性(U/g 鮮重)=(A 對(duì)照管-A 測(cè)定管)/A 對(duì)照管÷(W÷V 樣總)×100 V 樣總：提取液總體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，5min。

相關(guān)文獻(xiàn)：

《ARSENATE INDUCED CHLOROSIS 1/ TRANSLOCON AT THE OUTER ENVOLOPE MEMBRANE OF CHLOROPLASTS 132 Protects Chloroplasts from Arsenic Toxicity 》 作者:Peitong Wang, Xi Chen, Xuan Xu, Chenni Lu, Wei Zhang, Fang-Jie Zhao 期刊:Plant physiology 影響因子:6.305 PMID: