產(chǎn)品名稱(chēng):線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ活性測(cè)定試劑盒
產(chǎn)品型號(hào):BC3245
產(chǎn)品特點(diǎn):線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ活性測(cè)定試劑盒品牌:Solarbio | 貨號(hào):BC3245 檢測(cè)方法 : 微量法 規(guī)格:100管/96樣
免費(fèi)咨詢(xún):010-50973130
線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ活性測(cè)定試劑盒
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑:
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微玻璃比色皿/96 孔板(非 聚苯乙烯材質(zhì))、研缽、冰和蒸餾水。
復(fù)合體Ⅲ的提取:
① 稱(chēng)取約0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞,加入1.0 mL提取液,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
② 4 ℃ 600 g離心10min。
③ 將上清液移另一離心管中,4 ℃ 11000 g離心15min。
④ 上清液即胞漿提取物,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅲ(此步可選做,可以判斷線粒體提 取效果)。
⑤ 在沉淀中加入200uL提取液,超聲波破碎(功率20%,超聲5秒,間隔10秒,重復(fù)15次),用于 復(fù)合體Ⅲ酶活性測(cè)定,并且用于蛋白含測(cè)定。
注意事項(xiàng):
1、盡保持比色皿內(nèi)反應(yīng)液溫度在37℃或25℃。可以在記錄初始吸光度A1后迅速將比色皿連同反 應(yīng)液一起放入37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)2分鐘,之后迅速取出比色 皿并擦干,記錄2min時(shí)的吸光度。
2、當(dāng)測(cè)定吸光值大于1時(shí),建議將樣品用提取液稀釋后測(cè)定,計(jì)算公式中注意乘以稀釋倍數(shù)。
3、此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度,推薦本公司BCA蛋白濃度含測(cè)定試劑盒。
4、由于提取液中含有蛋白,所以在測(cè)定樣品蛋白濃度時(shí)需要去提取液本身的蛋白含(單獨(dú)測(cè)定)。
5、推薦使用樣本蛋白濃度計(jì)算酶活,若用樣本鮮重計(jì)算,則需加測(cè)胞漿提取物酶活,上清和沉淀 酶活之和方為總酶活。
6、本試劑盒試劑足夠完成 100 管反應(yīng)。
7、附:使用樣本重計(jì)算公式:(樣本檢測(cè)數(shù)為 100T/24S)
相關(guān)文獻(xiàn):
《Weanling Offspring of Dams Maintained on Serine-Deficient Diet Are Vulnerable to Oxidative Stress》 作者:Liuqin He, Haiwen Zhang, and Xihong Zhou 期刊:Oxidative Medicine and Cellular Longevity 影響因子:4.868 PMID:30305866
《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.259 PMID:29503638
線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ活性測(cè)定試劑盒
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