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產(chǎn)品名稱:過氧化氫酶(CAT)測定試劑盒 微量法

產(chǎn)品型號:BC0205

產(chǎn)品報價:

產(chǎn)品特點:過氧化氫酶(CAT)測定試劑盒 微量法
CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系統(tǒng)中具有重要作用。

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BC0205過氧化氫酶(CAT)測定試劑盒 微量法的詳細資料:

過氧化氫酶(CAT)測定試劑盒 微量法說明書

貨號: BC0205 規(guī)格:100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容: 提取液:100mL×1 瓶,4℃保存; 工作液:24mL×1 瓶,4℃保存;

產(chǎn)品簡介: CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是主要的 H2O2清除酶,在活性氧清除系 統(tǒng)中具有重要作用。 H2O2在 240nm 下有特征吸收峰,CAT 能夠分解 H2O2,使反應溶液 240nm 下的吸光度隨反應時間而下降,根 據(jù)吸光度的變化率可計算出 CAT 活性。

過氧化氫酶(CAT)測定試劑盒 微量法操作步驟

一、粗酶液提取: 1、 細菌、細胞或組織樣品的制備 收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每 500 萬細菌或細胞加入 1ML 提取液,超聲波破碎細菌或 細胞(功率 20%或 200W,超聲 3 秒,間隔 10 秒。重復 30 次);8000g 4℃離心 10 分鐘,取上清,置冰上待測。 稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10 分鐘,取上清,置冰上待測。 2、 血清(漿)樣品:直接檢測。

二、操作步驟 1、 分光光度計或酶標儀預熱 30min,調(diào)節(jié)波長到 240nm,蒸餾水調(diào)零。 2、 測定前將 CAT 檢測工作液 37℃(哺乳動物)或 25℃(其他物種)水浴 10min。 3、 加入 10μL 樣本和 190μL 工作液,混勻 5s 或者在酶標儀上振動 5s 并立即計時,記錄 240nm 下的初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。計算ΔA=A1-A2

三、CAT 活性計算(用石英比色皿):

1、 血清(漿)CAT 活力的計算: 單位的定義:每毫升血清(漿)在反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/mL)=反應總體積÷樣本體積÷反應時間÷H2O2消光系數(shù)(43.6×10 -3)×ΔA=459×ΔA

2、 組織 CAT 活力計算: (1) 按樣本蛋白濃度計算: 單位的定義:每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/mg prot)=反應總體積÷樣本體積÷反應時間÷H2O2消光系數(shù)(43.6×10 -3)×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度(mg/mL) =459×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度(mg/mL) (2) 按樣本鮮重計算: 單位的定義:每 g 組織在反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/g mass)=反應總體積÷樣本體積÷反應時間÷H2O2 消光系數(shù)(4.36×10 4)×ΔA÷樣本鮮重(g/mL) =459×ΔA÷樣本鮮重(g/mL)

3、 細菌或細胞中 CAT 活力計算: 單位的定義:每 1 萬個細菌或細胞在每分鐘反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/10 4 cell)=反應總體積÷樣本體積÷反應時間÷H2O2消光系數(shù)(4.36×10 4)×ΔA÷細胞密度(10 4 cell /mL) =0.917×ΔA V 反總:反應體系總體積,2×10 -4L;ε: NADH 摩爾吸光系數(shù),4.36×10 4L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm; V 樣:加入樣本體積,0.01ml;V 樣總:加入提取液體積,1ml;T:反應時間,1min。W,樣本質(zhì)量,g;Cpr: 上清液蛋白濃度,mg/ml;500:細胞或細菌總數(shù),500 萬。

CAT 活性計算(用 96 孔板):

1、 血清(漿)CAT 活力的計算: 單位的定義:每毫升血清(漿)在反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/mL)=反應總體積÷樣本體積÷反應時間÷H2O2消光系數(shù)(4.36×10 4)×ΔA=918×ΔA

2、 組織 CAT 活力計算: (1) 按樣本蛋白濃度計算: 單位的定義:每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/mg prot)=反應總體積÷樣本體積÷反應時間÷H2O2消光系數(shù)(4.36×10 4)×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度(mg/mL) =918×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度(mg/mL) (2) 按樣本鮮重計算: 單位的定義:每 g 組織在反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/g mass)=反應總體積÷樣本體積÷反應時間÷H2O2 消光系數(shù)(4.36×10 4)×ΔA÷樣本鮮重(g/mL) =918×ΔA÷樣本鮮重(g/mL)

3、 細菌或細胞中 CAT 活力計算: 單位的定義:每 1 萬個細菌或細胞在每分鐘反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/10 4 cell)=反應總體積÷樣本體積÷反應時間÷H2O2消光系數(shù)(4.36×10 4)×ΔA÷細胞密度(10 4 cell /mL) =1.836×ΔA V 反總:反應體系總體積,2×10 -4L;ε: NADH 摩爾吸光系數(shù),4.36×10 4L/mol/cm;d:比色皿光徑,0.5cm; V 樣:加入樣本體積,0.01ml;V 樣總:加入提取液體積,1ml;T:反應時間,1min。W,樣本質(zhì)量,g;Cpr: 上清液蛋白濃度,mg/ml;500:細胞或細菌總數(shù),500 萬。 1、 預實驗如果發(fā)現(xiàn)酶活性過高(其實 OD 值過大),可用提取液適當稀釋樣品。 2、 如果酶活性過低,延長反應時間(3 分鐘之內(nèi)),并將反應時間準確代入計算公式。

一、粗酶液提取: 1、 細菌、細胞或組織樣品的制備 收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每 500 萬細菌或細胞加入 1ML 提取液,超聲波破碎細菌或 細胞(功率 20%或 200W,超聲 3 秒,間隔 10 秒。重復 30 次);8000g 4℃離心 10 分鐘,取上清,置冰上待測。 稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10 分鐘,取上清,置冰上待測。 2、 血清(漿)樣品:直接檢測。

一、粗酶液提取: 1、 細菌、細胞或組織樣品的制備 收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每 500 萬細菌或細胞加入 1ML 提取液,超聲波破碎細菌或 細胞(功率 20%或 200W,超聲 3 秒,間隔 10 秒。重復 30 次);8000g 4℃離心 10 分鐘,取上清,置冰上待測。 稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10 分鐘,取上清,置冰上待測。 2、 血清(漿)樣品:直接檢測。

一、粗酶液提取: 1、 細菌、細胞或組織樣品的制備 收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每 500 萬細菌或細胞加入 1ML 提取液,超聲波破碎細菌或 細胞(功率 20%或 200W,超聲 3 秒,間隔 10 秒。重復 30 次);8000g 4℃離心 10 分鐘,取上清,置冰上待測。 稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10 分鐘,取上清,置冰上待測。 2、 血清(漿)樣品:直接檢測。

一、粗酶液提取: 1、 細菌、細胞或組織樣品的制備 收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每 500 萬細菌或細胞加入 1ML 提取液,超聲波破碎細菌或 細胞(功率 20%或 200W,超聲 3 秒,間隔 10 秒。重復 30 次);8000g 4℃離心 10 分鐘,取上清,置冰上待測。 稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10 分鐘,取上清,置冰上待測。 2、 血清(漿)樣品:直接檢測。

一、粗酶液提取: 1、 細菌、細胞或組織樣品的制備 收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每 500 萬細菌或細胞加入 1ML 提取液,超聲波破碎細菌或 細胞(功率 20%或 200W,超聲 3 秒,間隔 10 秒。重復 30 次);8000g 4℃離心 10 分鐘,取上清,置冰上待測。 稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10 分鐘,取上清,置冰上待測。 2、 血清(漿)樣品:直接檢測。

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GDH(EC 1.4.1.2)廣泛分布于植物中,和谷氨酸合成酶(GOGAT)共同參與谷氨酸的合成,在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH,生成谷氨酸和 NAD+,引起 340nm 吸光度下降。通過測定 340nm 吸光度的下降速率,計算 GDH 活性。

GDH(EC 1.4.1.2)廣泛分布于植物中,和谷氨酸合成酶(GOGAT)共同參與谷氨酸的合成,在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH,生成谷氨酸和 NAD+,引起 340nm 吸光度下降。通過測定 340nm 吸光度的下降速率,計算 GDH 活性。

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GDH(EC 1.4.1.2)廣泛分布于植物中,和谷氨酸合成酶(GOGAT)共同參與谷氨酸的合成,在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH,生成谷氨酸和 NAD+,引起 340nm 吸光度下降。通過測定 340nm 吸光度的下降速率,計算 GDH 活性。

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GDH(EC 1.4.1.2)廣泛分布于植物中,和谷氨酸合成酶(GOGAT)共同參與谷氨酸的合成,在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH,生成谷氨酸和 NAD+,引起 340nm 吸光度下降。通過測定 340nm 吸光度的下降速率,計算 GDH 活性。

GDH(EC 1.4.1.2)廣泛分布于植物中,和谷氨酸合成酶(GOGAT)共同參與谷氨酸的合成,在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH,生成谷氨酸和 NAD+,引起 340nm 吸光度下降。通過測定 340nm 吸光度的下降速率,計算 GDH 活性。

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