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產(chǎn)品名稱:豚鼠外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒

產(chǎn)品型號(hào):P4090

產(chǎn)品報(bào)價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):豚鼠外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒
貨號(hào):P4090
規(guī)格:200ml/KIT
保存:室溫避光儲(chǔ)存,有效期少 2 年。

免費(fèi)咨詢:010-50973130

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P4090豚鼠外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒的詳細(xì)資料:

豚鼠外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒 
貨號(hào):
P4090
規(guī)格:2×200ml/KIT
保存:室溫避光儲(chǔ)存,有效期少 2 年。

 

產(chǎn)品組成:
                   名稱              規(guī)格
                   試劑 A            200ml
                   紅細(xì)胞裂解液      100ml
                   全血及組織稀釋液  200ml
                   細(xì)胞洗滌液        200ml

 

注意事項(xiàng):
     A.本實(shí)驗(yàn)要求,在正常大氣壓下,分離液、分離樣本以及分離環(huán)境溫度為20℃±2℃。分離液在低溫時(shí)呈較高密度,在高溫時(shí)呈較低密度。細(xì)胞分離液從冰箱取出后,不可立即使用,操作前可將樣本和分離液復(fù)溫18-22℃。為獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,好在取血后2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),血液提取后存放時(shí)間越長(zhǎng)細(xì)胞活性越低。
    B.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,如需稀釋血液或洗滌細(xì)胞,不可使用含Ca 2+ 、Mg 2+ 離子的緩沖液及培養(yǎng)液,其成分會(huì)導(dǎo)致血細(xì)胞凝集,大大降低細(xì)胞得率及純度。
    C.優(yōu)抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素。注意在血液稀釋過(guò)程中去除抗凝劑體積。
    D.好使用無(wú)靜電反應(yīng)的離心管,推薦使用未經(jīng)過(guò)堿處理的玻璃離心管。
    E.由于各品牌離心機(jī)的性能不同,國(guó)內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異,可能影響分離效果,用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間,摸索的分離條件(具體分離條件各實(shí)驗(yàn)室自定)。

 

分離方法 :
    1. 取1ml新鮮抗凝血,與全血及組織稀釋液1:1 混勻后小心加于1份A液之液面上;
    2. 以500g(約1800轉(zhuǎn)/分)離心25分鐘(半徑15cm水平轉(zhuǎn)子)。
    3. 此時(shí)離心管中由上下細(xì)胞分四層。*層:為血漿層。第二層:為環(huán)狀乳白色的單個(gè)核細(xì)胞層。
    第三層:為略帶混濁的分離液層(富集一定量的中性粒細(xì)胞)。第四層:為紅細(xì)胞層。棄去*層血漿層及第二層細(xì)胞,收集第三層分離液層和第四層紅細(xì)胞層,放入含細(xì)胞洗滌液10ml的試管中,充分混勻后,以500g約(1800轉(zhuǎn)/分)離心30分鐘。沉淀經(jīng)1次洗滌后用紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞,再經(jīng)3次洗滌去除紅細(xì)胞內(nèi)溶物和碎片后取沉淀細(xì)胞即為所需中性粒細(xì)胞。
    注:A. 提取率約為80%。
    B. 紅細(xì)胞裂解過(guò)程詳見“紅細(xì)胞裂解液使用說(shuō)明”。


紅細(xì)胞裂解液使用說(shuō)明 :
    本公司紅細(xì)胞裂解液在裂解紅細(xì)胞的同時(shí)不損傷并在一定程度上保護(hù)淋巴細(xì)胞(lymphocyte)或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞,所獲得的細(xì)胞可保持完好的生物活性和完整的細(xì)胞形態(tài)。另外,本裂解液中無(wú)DNA及RNA酶,配合細(xì)胞分離液使用所提細(xì)胞可廣泛用于細(xì)胞培養(yǎng)及分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
    紅細(xì)胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer),也稱ACK Lysis Buffer,是一種用于從人或鼠等的血液或組織細(xì)胞樣品中裂解并去除無(wú)細(xì)胞核紅細(xì)胞的溶液。
    本裂解液不適用于有細(xì)胞核紅細(xì)胞的裂解,例如鳥或禽類的紅細(xì)胞。本裂解液經(jīng)過(guò)無(wú)菌處理,處理過(guò)的血液或組織細(xì)胞樣品可以用于后續(xù)的原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測(cè)。


使用說(shuō)明:
    A.  對(duì)于組織細(xì)胞樣品:
    a. 新鮮組織經(jīng)過(guò)膠原酶或胰酶等消化處理,通過(guò)適當(dāng)方法分散成細(xì)胞懸液,離心棄上清。
    b. 加入3-5倍細(xì)胞體積的紅細(xì)胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。例如細(xì)胞沉淀的體積為1ml,則加入3-5ml的紅細(xì)胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。
    c. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
    d. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測(cè)。
    e. 洗滌1-2次:加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液,重懸沉淀,400-500g離心2-3分鐘,棄上清。可再重復(fù)1次,共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應(yīng)少為細(xì)胞沉淀體積的5倍。4℃離心效果更佳。
    f. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
    B.  對(duì)于組織細(xì)胞樣品無(wú)需洗滌的快速操作步驟:
    a. 新鮮組織經(jīng)過(guò)膠原酶或胰酶等消化處理,通過(guò)適當(dāng)方法分散成細(xì)胞懸液,離心棄上清。
    b. 對(duì)于0.2ml細(xì)胞沉淀加入1ml紅細(xì)胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。本步驟在室溫或4度操作均可。
    c. 加入15-20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液,混勻。
    d. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
    e. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測(cè)。
    f. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
注:對(duì)于常規(guī)步驟,多一步洗滌過(guò)程中的離心,但可以節(jié)省洗滌液的用量,并且洗滌效果也更好一些,同時(shí)不需要大體積的離心管。快速步驟少了一次離心,但洗滌效果略差一些,同時(shí)需要大體積的離心管。
    C.  對(duì)于血液樣品:
    a. 取新鮮抗凝血,400-500g離心5分鐘,離心棄上清。
    b. 加入6-10倍細(xì)胞體積的紅細(xì)胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。例如細(xì)胞沉淀的體積為1ml,則加入6-10ml的紅細(xì)胞裂解液。 本步驟在室溫或4度操作均可。 注意: 對(duì)于鼠的血液, 裂解1-2分鐘已經(jīng)足夠,對(duì)于人的外周血,宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間4-5分鐘,并且裂解過(guò)程中宜適當(dāng)偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。
   c. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
   d. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測(cè)。
   e. 洗滌1-2次:加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液,重懸沉淀,400-500g離心2-3分鐘,棄上清。可再重復(fù)1次,共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應(yīng)少為細(xì)胞沉淀體積的5倍。4℃離心效果更佳。
   f. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
注:對(duì)于微量或少量的血液樣品,可以在*步中不進(jìn)行離心棄上清的操作,直接在第二步中加入10倍血液體積的紅細(xì)胞裂解液,并在室溫或4℃裂解4-5分鐘。對(duì)于鼠的血液,裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠,對(duì)于人的外周血,宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間10分鐘,但通常不宜超過(guò)15分鐘,并且裂解過(guò)程中宜適當(dāng)偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。后續(xù)步驟相同。
   D.  對(duì)于血液樣品無(wú)需洗滌的快速操作步驟:
   a. 每1ml新鮮抗凝血中加入10ml紅細(xì)胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解4-5分鐘。本步驟在室溫或4度操作均可。注意:對(duì)于鼠的血液,裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠,對(duì)于人的外周血,宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間10分鐘,但通常不宜超過(guò)15分鐘,并且裂解過(guò)程中宜適當(dāng)偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。
   b. 加入20-30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液,混勻。
   c. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
   d. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測(cè)。
   e. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
      注:對(duì)于常規(guī)步驟,多一步洗滌過(guò)程的離心,但可以節(jié)省洗滌液的用量,并且洗滌效果也更好一些,同時(shí)不需要大體積的離心管。快速步驟少了一次離心,但洗滌效果略差一些,同時(shí)需要大體積的離心管。

 

產(chǎn)品性能指標(biāo) :

pH 7.0-7.5
滲透壓 280-340mOsmol/kg
內(nèi)毒素 ≤0.5EU/ml
無(wú)菌 直接接種培養(yǎng)14 天后培養(yǎng)基澄清
澄明度及不溶性顆粒物 每50ml 溶液中含10µm 以上的不溶性微粒20 粒以下,
含25µm 以上的不溶性微粒5 粒以下


貯藏及保存期限 :
    本分離液是敏光型的,應(yīng)在18℃-25℃避光保存,有效期兩年。啟封后置4℃保存,有效期一周,若保證無(wú)微生物污染,啟封后可置4℃長(zhǎng)期保存。未啟封前保存溫度較低(10℃以下)時(shí)分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。

 

豚鼠外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒訂購(gòu)說(shuō)明:

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品,需提前1-2日預(yù)訂,海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化,若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。 
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整,部分城市可到17點(diǎn)整,因超過(guò)截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請(qǐng)辦理完貨款后,將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。


運(yùn)輸說(shuō)明:

1、極低溫產(chǎn)品:極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來(lái),再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
2、低溫產(chǎn)品:低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來(lái),再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續(xù)一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
3、常溫產(chǎn)品:常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中無(wú)需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫(kù)房人員快速配貨,準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。

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