產品名稱：谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)活性檢測試劑盒

產品英文名：Glutathione Peroxidase (GPX) Assay Kit

產品貨號：BC1190              產地：北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓

產品規格：50管/48樣             產品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：1600
庫存狀態：現貨                          
關鍵字：谷胱甘肽過氧化物酶試劑盒|活性檢測試劑盒|GPX含量檢測|試劑盒|
簡要介紹：
氧化型谷胱甘肽（GSSG）是谷胱甘肽（GSH）的氧化形式，又稱為二硫代谷胱甘肽，是兩分子的谷胱甘肽氧化而成。GSSG會被谷胱甘肽還原酶還原成GSH，因此機體中大多數是以還原型形式存在。測定細胞內GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能夠很好地反映細胞所處的氧化還原狀態。本試劑盒利用谷胱甘肽能和5，5’-二硫代-雙-（2-硝基ben甲酸）（5，5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反應產生2-硝基-5-巰基ben甲酸，2-硝基-5-巰基ben甲酸在波長412nm處具有大光吸收的特點，通過2-乙烯吡dian抑制樣品中原有的還原型谷胱甘肽，然后利用谷胱甘肽還原酶將GSSG還原為GSH，借此測定氧化型谷胱甘肽的含量。
 

產品詳細描述
產品內容：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體×1支，-20℃保存。
 試劑四：液體×1瓶，4℃保存。
    工作液配制：臨用前，在試劑二中加入試劑一40 mL，充分震蕩溶解后加入全部試劑三，混勻。（當天用完）
產品說明：
谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase, GSH-Px）是谷胱甘肽氧化還原循環中催化還原型谷胱甘肽（GSH）氧化的主要酶之一。GSH-Px不僅能夠特異地催化還原型谷胱甘肽與ROS反應，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，從而保護生物膜免受ROS的損害，維持細胞的正常功能；而且具有保護肝臟、提高機體免疫力、拮抗有害金屬離子對機體的傷害和增加機體抗輻射等能力。
GSH-Px催化H₂O₂氧化GSH，產生GSSG；谷胱甘肽還原酶（GR）催化NADPH還原GSSG，再生GSH，同時NADPH氧化生成NADP⁺；NADPH在340 nm有特征吸收

谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)活性檢測試劑盒

自備儀器和用品：
紫外-可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、1mL石英比色皿和蒸餾水。
操作步驟：
一、粗酶液提取：

1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取0.1g 組織，加入1mL 試劑一）進行冰浴勻漿。10000rpm，4℃離心10min，取上清置冰上待測(如上清不清澈，再離心3min)。
2. 細菌、真菌：按照細胞數量10⁴個：試劑一體積（ml）500~1000:1 的比例，建議500 萬細胞加入1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3 s，間隔7s，總時間3min）然后10000rpm，4℃，離心10min，取上清置冰上待測(如上清不清澈，再離心3min)。
3. 血清等液體：直接測定。

二、GSH-Px測定操作：
1. 分光光度計預熱30 min，調節波長到340 nm，蒸餾水調零。
2. 混合試劑在25℃或者37℃（哺乳動物）水浴中預熱30min以上。
3. 空白管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL蒸餾水、800μL預熱的工作液，100μL試劑四，迅速混勻后于340nm處測定第10 s處的吸光值，37℃水浴3min后迅速拿出測量吸光度，分別記為A空1和A空2。計算△A空=A空1-A空2。（空白管只需做1~2個）
4. 測定管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、800μL預熱的工作液，100μL試劑四，迅速混勻后于340nm處測定第10 s處的吸光值，37℃水浴3min后迅速拿出測量吸光度，分別記為A測1和A測2。計算△A測=A測1-A測2。
三、GSH-Px活性計算：
（1）按蛋白濃度計算
GSH-Px活力單位定義：一定溫度下，每mg蛋白在反應體系中每分鐘催化1nmol NADPH氧化定義為一個酶活力單位。
GSH-Px (U/mg prot) =[ (△A測定管-△A空白管)÷ε÷d×V反總×10⁶] ÷[Cpr×V樣]÷T
             =536×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
GSH-Px活力單位定義：一定溫度中，每g樣品在反應體系中每分鐘催化1μmol NADPH氧化定義為一個酶活力單位。
GSH-Px (U/g 鮮重)=[ (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總×10⁶] ÷(V樣÷V樣總×W)÷T
            =536×(△A測定管-△A空白管)÷W
(3) 按細胞數量計算
GSH-Px 活力單位定義：一定溫度中，每10⁴個細胞每分鐘催化1μmol NADPH 氧化定義為一個酶活力單位。
GSH-Px (U/10⁴ cell)=[(△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×109]÷（細胞數量×V 樣÷V樣總）÷T
=536×(△A 測定管-△A 空白管)÷細胞數量
(4) 按液體體積計算
GSH-Px 活力單位定義：一定溫度中，每毫升液體每分鐘催化1μmol NADPH 氧化定義為一個酶活力單位。
GSH-Px (U/ml)=[(△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×109]÷V 樣÷T
=536×(△A 測定管-△A 空白管)
△A空白管=A空1-A空2；△A測定管=A測1-A測2。
ε：NADPH摩爾消光系數6.22×10³L/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V反總：反應體系總體積，0.001 L；10⁶：1 mol=1×10⁶μmol；Cpr：上清液蛋白濃度（mg/mL）；V樣：加入反應體系中上清液體積，100μL =0.1 mL；T：反應時間，3 min；W ：樣品質量，g。
注意事項：
（1）樣品處理等過程均需要在冰上進行，且須在當日測定酶活力；
（2）混合試劑和底物液須臨用前配制，配完后置于冰上；
（3）測定過程操作須迅速；
（4）細胞中GSH-Px活性測定時，細胞數目須在300萬-500萬之間，細胞中GSH-Px的提取時可加試劑一后研磨或超聲波處理，不能用細胞裂解液處理細胞。

相關文獻：
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《Antioxidant activity of whole grain Qingke (Tibetan Hordeum vulgare L.) toward oxidative stress in d-galactose induced mouse model》 作者:Xuejuan Xia,Yuxiao,Xing,Guannan Li,Jinsong Wu,Jianquan Kan 期刊:Journal of Functional Foods 影響因子:3.197 PMID:
《Toxic effect of microcystin-LR on blood vessel development》 作者:Qilong Wang, Guosheng Xiao, Guoliang Chen, Huihui Du, Linping Wang,Dongqin Guo & Tingzhang Hu 期刊:Toxicological & Environmental Chemistry 影響因子:3.547 PMID:28189720
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448