產品名稱:硝酸還原酶(NR)活性檢測試劑盒
產品型號:BC0080
產品特點:硝酸還原酶(NR)活性檢測試劑盒測定意義:NR廣泛存在于植物中,是植物硝態(tài)氮轉化為氨態(tài)氮的關鍵酶,也是誘導酶,對作物的產量和品質有影響。
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硝酸還原酶(NR)活性檢測試劑盒
產品規(guī)格:50管/24樣 產品商標:solarbio
保存與運輸:4℃保存或-20℃保存; 參考價格:300
庫存狀態(tài):現貨
關鍵字: 硝酸還原酶檢測試劑盒|NR檢測試劑盒|硝酸還原酶|試劑盒
簡要介紹:
NR廣泛存在于植物中,是植物硝態(tài)氮轉化為氨態(tài)氮的關鍵酶,也是誘導酶,對作物的產量和品質有影響。
NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,NO3ˉ+NADH+H+→NO2ˉ+NAD++H2O ;產生的亞硝酸鹽能夠在酸性條件下,與對氨基ben磺酸及α-萘胺定量生成紅色偶氮化合物;生成的紅色偶氮化合物在540 nm有大吸收峰,可用分光光度法測定。
產品詳細描述
產品內容:
誘導劑儲備液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
提取液:液體25mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體40mL×1瓶,-20℃保存。
試劑二:液體10mL×1瓶,-20℃保存。
試劑三:液體20mL×1瓶,4℃保存。
試劑四:液體20mL×1瓶,4℃保存。
標準液:NaNO2標準儲備液1mL,10μmol/mL,-20℃保存。
誘導劑應用液的配制:用時將誘導劑儲備液稀釋10倍,即取10mL誘導劑儲備液加90mL蒸餾水,充分混勻。
標準液的配制:將標準儲備液用蒸餾水稀釋為1.5、1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1μmol/mL 濃度的標準溶液 。
產品說明:
NR( EC 1.7.1.3)廣泛存在于植物中,是植物硝態(tài)氮轉化為氨態(tài)氮的關鍵酶,也是誘導酶,對作物的產量和品質有影響。
NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,NO3ˉ+NADH+H+→ NO2ˉ +NAD++H2O;產生的亞硝酸鹽能夠在酸性條件下,與對–氨基ben磺酸α-萘胺定量生成紅色偶氮化合物;生成的紅色偶氮化合物在540 nm有大吸收峰,可用分光光度法測定。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣品測定的前處理
1、取適量誘導劑于燒杯中,將新鮮標本洗凈,濾紙吸干,放入誘導劑應用液中(淹沒即可),浸泡2h,取出樣本,濾紙吸干后,-20℃冷凍30min,取出樣本,濾紙吸干。(根據需要進行誘導處理)
2、稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液,冰浴研磨,4000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測。
二、測定步驟
1、分光光度計預熱30min以上,調節(jié)波長540nm,蒸餾水調零。
2、樣本測定(在EP管中加入下列試劑)
試劑名稱(μL) | 加樣孔 | |||
測定管 | 對照管 | 標準管 | 空白管 | |
樣本 | 100 | 100 | ||
標準溶液(μmol/mL) | 100 | |||
雙蒸水 | 100 | |||
試劑一 | 375 | 375 | 375 | 375 |
試劑二 | 125 | 125 | 125 |
混勻后,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴30min
試劑二 | 125 | |||
試劑三 | 250 | 250 | 250 | 250 |
試劑四 | 250 | 250 | 250 | 250 |
混勻,顯色20min,4000g 常溫離心10min,取上清,540nm下比色,計算A測定-A對照。
注意:空白管只需測一次。
三、NR活性計算:
1. 標準曲線的繪制:
以標準溶液濃度為x軸,以ΔA(A標準管-A空白管)為y軸繪制標準曲線,得到線性回歸方程y=kx+b。將(A測定-A對照)帶入方程中,計算出x(μmol/mL)。
2. NR活性的計算:
(1)按樣本鮮重計算:
單位定義:每小時每g鮮重樣品中催化產生 1μmol NO2ˉ的量為一個 NR活力單位。
NR(U/g 鮮重)=x×V樣品÷(W÷V樣總×V樣品)÷T= 2x÷W。
(2)按樣本蛋白濃度計算:
單位定義:每小時每mg組織蛋白催化產生 1μmol NO2ˉ的量為一個 NR活力單位。
NR(U/mg prot)=x×V樣品÷(V樣品×Cpr)÷T=2x÷Cpr。
V樣品:吸取樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,0.5h;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。
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硝酸還原酶(NR)活性檢測試劑盒
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