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多酚氧化酶(PPO)活性檢測試劑盒

產品名稱：多酚氧化酶測定試劑盒 （微量法）
產品英文名：Micro Polyphenol Oxidase (PPO) Assay Kit
產品貨號：BC0195                          產地：北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓
產品規格：100管/48樣                   產品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：1000
庫存狀態：現貨                          
關鍵字：多酚氧化酶測定試劑盒|微量法|

簡要介紹：
PPO能夠催化鄰苯二酚產生醌，后者在525nm有特征光吸收。
PPO（EC1.10.3.1）主要存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，是一種含銅的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化產生醌，從而引起褐化，與果蔬加工、茶葉品質和組培等密切相關。

產品詳細描述

商品貨號：	商品品牌：	規格	基本售價：	選擇規格
BC0195-100管/48樣	Solarbio	100管/48樣	1000.00元

產品簡介： 
PPO 主要存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，是一種含銅的氧化酶，能使一元酚和二元 酚氧化產生醌，從而引起褐化，與果蔬加工、茶葉品質和組培等密切相關。 PPO 能夠催化鄰苯二酚產生醌，后者在 410nm 有特征光吸收。

試驗中所需的儀器和試劑： 
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研 缽、冰和蒸餾水。

產品內容： 
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存，用前混勻即可；
試劑一：液體 20mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。

操作步驟：  
一、粗酶液提取： 
1、收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液，超聲 波破碎細菌或細胞（功率 20％，超聲 3 秒，間隔 10 秒，重復 30 次）；8000g 4℃離心 10 分鐘，取 上清，置冰上待測。
2、稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。

二、測定步驟：
1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長 410nm，蒸餾水調零。
2、樣本測定（在 EP 管中依次加入下列試劑）  

充分混勻，5000g，常溫離心 10min，收集上清，取 200μL 微量玻璃比色皿或 96 孔板中，410nm 處檢測測定管和對照管吸光度，計算ΔA=A 測定-A 對照。

PPO活性計算：  
a.用微量玻璃比色皿測定的計算公式如下 
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每分鐘每 mg 組織蛋白在反應體系中(300μL)使 410nm 處吸光值變化 0.01 定義為一個 酶活力單位。
PPO（U/mgprot）=提取液總體積（1000μL）÷樣本體積（50μL）÷反應時間（10min）÷0.01×（A 測 定-A 對照）÷蛋白濃度（mg/mL）=200×ΔA÷蛋白濃度（mg/mL） 此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每分鐘每 g 組織在反應體系中(300μL)使 410nm 處吸光值變化 0.01 定義為一個酶活力 單位。
PPO（U/g 鮮重）=提取液總體積（1000μL）÷樣本體積（50μL）÷反應時間（10min）÷0.01×（A 測 定-A 對照）÷樣本鮮重（g/mL）=200×ΔA÷樣本鮮重（g/mL）
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每分鐘每 1 萬個細菌或細胞在反應體系中(300μL)使 410nm 處吸光值變化 0.01 定義為 一個酶活力單位。
PPO（U/104 cell）=提取液總體積（1000μL）÷樣本體積（50μL）÷反應時間（10min）÷0.01×（A 測 定-A 對照）÷500=0.4×ΔA

b.用 96 孔板測定的計算公式如下
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每分鐘每 mg 組織蛋白在反應體系中(300μL)使 410nm 處吸光值變化 0.005 定義為一個 酶活力單位。
PPO（U/mgprot）=提取液總體積（1000μL）÷樣本體積（50μL）÷反應時間（10min）÷0.005×（A 測定-A 對照）÷蛋白濃度（mg/mL）=400×ΔA÷蛋白濃度（mg/mL） 此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。
（2）按樣本鮮重計算： 
單位的定義：每分鐘每 g 組織在反應體系中(300μL)使 410nm 處吸光值變化 0.005 定義為一個 酶活力單位。
PPO（U/g 鮮重）=提取液總體積（1000μL）÷樣本體積（50μL）÷反應時間（10min）÷0.005×（A 測定-A 對照）÷樣本鮮重（g/mL）=400×ΔA÷樣本鮮重（g/mL）
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每分鐘每 1 萬個細菌或細胞在反應體系中(300μL)使 410nm 處吸光值變化 0.005 定義為 一個酶活力單位。
PPO（U/104 cell）=提取液總體積（1000μL）÷樣本體積（50μL）÷反應時間（10min）÷0.005×（A 測定-A 對照）÷500=0.8×ΔA

注意事項： 
不同樣本的多酚氧化酶的反應溫度略有差別，可在 25-37℃之間進行調節。

相關文獻：
《Effectof L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus)》 作者:Beibei Li，Yang Ding，Xiuli Tang，Guoyi Wang，Shujuan Wu，Xianxian Li，Xiaofei Huang，Tongtong Qu，Jifeng Chen 期刊:Food and Bioprocess Technology 影響因子:3.032 PMID:
《MTA1 promotes the invasion and migration of pancreatic cancer cells potentially through the HIF-α/VEGF pathway》 作者:B Li, Y Ding, X Tang, G Wang, S Wu, X Li 期刊:Journal of Receptor and Signal Transduction Research. 影響因子:2.998 PMID:30396299

多酚氧化酶(PPO)活性檢測試劑盒