產品名稱:：  谷氨酸脫氫酶(GDH)活性檢測試劑盒

產品英文名: Glutamic Acid Dehydrogenase（GDH）Assay Kit

產品貨號：BC1460             產地：北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓

產品規格：50管/48樣         產品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：650
庫存狀態：現貨                          
關鍵字:  谷氨酸脫氫酶檢測試劑盒|GDH檢測試劑盒|谷氨酸脫氫酶|試劑盒

簡要介紹：
GDH（EC 1.4.1.2）廣泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同參與谷氨酸的合成，在氨同化和轉化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。
GDH催化NH₄⁺、α-酮戊二酸和NADH，生成谷氨酸和NAD⁺，引起340nm吸光度下降。通過測定340nm吸光度的下降速率，計算GDH活性。

產品詳細描述
產品內容：
提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存。
產品說明：
GDH（EC 1.4.1.2）廣泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同參與谷氨酸的合成，在氨同化和轉化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。
GDH催化NH₄⁺、α-酮戊二酸和NADH，生成谷氨酸和NAD⁺，引起340nm吸光度下降。通過測定340nm吸光度的下降速率，計算GDH活性。
需自備的儀器和用品:
     紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、粗酶液提取：
1、收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每500萬細菌或細胞加入1mL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復30次）；8000g4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測。
2、稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測。
二、測定步驟：

1. 紫外分光光度計預熱30min以上，調節波長340nm，蒸餾水調零。
2. 樣本測定

（1）工作液的配制：臨用前將試劑一加入試劑二中混合溶解，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴5min；
（2）取1mL工作液和0.05mL樣本于光徑為1cm的1mL石英比色皿中，混勻，加樣本的同時開始計時，在340 nm波長下記錄20秒時的初始吸光度A1和5分20秒時的吸光度A2，計算ΔA=A1-A2。注：當ΔA大于0.5時，將樣本進行稀釋后測量。
三、GDH活性計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
GDH（U/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(Cpr×V樣) ÷T=675×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
GDH（U/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V樣÷V樣總×W)÷T=675×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
GDH（U/10⁴ cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V樣÷V樣總×500)÷T=1.35×ΔA
V反總：反應體系總體積，1.05×10^-3 L；ε：NADH摩爾消光系數，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.05 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。

相關文獻：
《Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants》 作者:Fei Ding, Qiannan Hu, Meiling Wang and Shuoxin Zhang 期刊:International Journal of Molecular Sciences 影響因子:4.183 PMID:30558146
 

谷氨酸脫氫酶(GDH)活性檢測試劑盒