產品名稱：NADP蘋果酸酶(NADP-ME)活性檢測試劑盒

產品英文名： NADP Malic Enzyme(NADP-ME) Assay Kit

產品貨號：BC1120         產地：北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓

產品規格：50管/48樣         產品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：420
庫存狀態：現貨                          
關鍵字：NADP蘋果酸酶試劑盒|活性檢測試劑盒|NADP-ME活性檢測|試劑盒

簡要介紹：
ME 廣泛存在于微生物、培養細胞、動物和植物胞漿中，尤其在植物組織中活性較高。ME 催 化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應，產生丙tong酸和 CO2，以及伴隨 NAD(P)+的還原反應，是蘋果酸代謝 的關鍵酶。ME 活性與生物合成和抗氧化密切相關。近年來植物 ME 活性測定較多，已經成為抗氧 化研究的熱點。根據輔酶專一性和對底物特異性的不同，可將 ME 分為 NAD-ME(EC1.1.1.38)和 NADP-ME(EC1.1.1.40)。 NADP-ME 催化 NADP+還原成 NADPH，在 340nm 下測定 NADPH 增加速率。

產品詳細描述
產品內容：
提取液：液體 70mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 40mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 20mL 提取液充分溶解備用；
試劑三：粉劑×2 支，4℃保存；用時每支加 1mL 雙蒸水充分溶解備用；
試劑四：粉劑×2 支，-20℃保存；用時每支加 500μL 雙蒸水充分溶解備用。
工作液：在 15mL 試劑二中加入 2mL 試劑三和 1mL 試劑四，可以根據比例現用現配。 產品說明：
ME 廣泛存在于微生物、培養細胞、動物和植物胞漿中，尤其在植物組織中活性較高。ME 催 化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應，產生丙tong酸和 CO2，以及伴隨 NAD(P)+的還原反應，是蘋果酸代謝 的關鍵酶。ME 活性與生物合成和抗氧化密切相關。近年來植物 ME 活性測定較多，已經成為抗氧 化研究的熱點。根據輔酶專一性和對底物特異性的不同，可將 ME 分為 NAD-ME(EC1.1.1.38)和 NADP-ME(EC1.1.1.40)。 NADP-ME 催化 NADP+還原成 NADPH，在 340nm 下測定 NADPH 增加速率。 
試驗中所需的儀器和試劑： 紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、1mL 石英比色皿、勻漿器和蒸餾水 

操作步驟： 

• 粗酶液提取：

細菌、細胞或組織樣品的制備： 細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，棄上清，按照每 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取 液，超聲波破碎細菌或細胞（功率 20％，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）。8000g 4℃離心 10min， 取上清，置冰上待測。
組織：稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置 冰上待測。 血清（漿）樣品：直接檢測。

• 測定步驟：
• 紫外分光光度計預熱 30min 以上，調節波長 340nm，蒸餾水調零。
• 將試劑一在 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）中保溫 15min 左右。
• 操作表：

將上述試劑按順序加入 1 mL 石英比色皿中，混勻后在 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）， 340 nm 波長下記錄初始吸光度 A1 和反應 1min 后的吸光度 A2，計算ΔA=A2-A1。

注意事項：

1. 若 A2-A1 大于 0.5，需將酶液用提取液稀釋，使 A2-A1 小于 0.5，可提高檢測靈敏度。
2. 實驗時，試劑三、試劑四和樣本在冰上放置，以免變性和失活。試劑一 37℃或 25℃水浴放置。
3. 比色皿中反應液的溫度必須保持 37℃或 25℃，取小燒杯一只裝入一定量的 37℃或 25℃蒸餾水， 將此燒杯放入 37℃或 25℃水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。
4. 兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結果的準確性。
5. 如果ΔA＜0.01，可將反應時間延長到 5 分鐘或 10 分鐘。

• NADP-ME 活性計算：
• 組織中 NADP-ME 活力的計算：
• 按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。
NADP-ME（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(Cpr×V 樣) ÷T=4823×ΔA÷Cpr

1. 按樣本鮮重計算：

單位的定義：每 g 組織在反應體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。
NADP-ME（U/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣÷V 樣總×W) ÷T =4823×ΔA÷W

1. 細菌或細胞中 NADP-ME 活力的計算：
2. 按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。
NADP-ME（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(Cpr×V 樣) ÷T=4823×ΔA÷Cpr

1. 按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力 單位。
NADP-ME（U/10 4 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣÷V 樣總×500) ÷T=9.65×ΔA。

1. 血清中 NADP-ME 活力的計算：

單位的定義：每 mL 血清在反應體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。
NADP-ME（U/mL）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷V 樣÷T =4823×ΔA。 V 反總：反應體系總體積，9×10 -4 L；ε：NADPH 摩爾消光系數，6.22×10 3L/mol/cm；d：比色 皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.03 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間， 1min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量，g；500：細菌或細胞總數，500 萬。

相關文獻：
《Understanding the stress responses of Kluyveromyces marxianus after an arrest during high-temperature ethanol fermentation based on integration of RNA-Seq and metabolite data》 作者:Xiaofen Fu， Pengsong Li，Lei Zhang， Shizhong Li 期刊:Applied Microbiology and Biotechnology 影響因子:3.67 PMID:30673809

NADP蘋果酸酶(NADP-ME)活性檢測試劑盒