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Solarbio支原體檢測方法介紹

支原體(mycoplasma):又稱霉形體,為目前發現的小的簡單原核生物。基因數量為480。支原體細胞中*可見的細胞器核糖體

培養支原體營養物質要求比一般細菌高,除基礎營養物質外還需加入10~20%人或動物血清以提供支原體所需的膽固醇。適pH7.8~8.0之間,低于7.0則死亡,但解脲支原體是個例外,它的適pH在6.0~6.5之間。

支原體污染的來源包括工作環境的污染、培養基的污染、操作者本身的污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細胞的原始組織或器官的污染。

分離培養法

分離培養法是支原體檢測的金標方法,其檢測度高。這種方法是從可疑的細胞培養體系中取樣,并接種到適宜支原體生長的瓊脂平板上。如果樣本中含有支原體,它們就會在這種瓊脂平板上*生長,終形成明顯可見的特征性菌落。分離培養法基本不會出現假陰性結果,因此被譽為支原體檢測金標準。不過分離培養法也存在兩個弊端,一是檢測時間太長,支原體要長出明顯克隆少需要4周時間。二是盡管可以檢測絕大多數支原體種類,分離培養法也有力所不及的時候

如果你實在不想等這么久,或者希望在分離培養法的等待過程中先拿到初步結果,你可以試一試DNA、PCR或酶學檢測方法。不過需要注意的是,上述檢測方法都不能單獨檢出所有類型的支原體,而且靈敏度也沒有分離培養法高,所以好結合使用兩種方法以獲得可靠的檢測結果。

DNA檢測需要將可疑樣品與指示細胞共同培養,因此一般需要幾天時間。DNA檢測所用的指示細胞通常是細胞質區域較大的Vero細胞,如果原樣本中含有支原體,那么當細胞DNA被熒光染料(如Hoechst染料)染色時,就可以在指示細胞的核周圍觀察到熒光斑點或熒光顆粒。分離培養法用來檢測支原體M. hyorhinis菌株并不可靠,而DNA法可以準確的將其檢測出來。

PCR法

PCR法也可以檢測M. hyorhinis菌株,PCR法檢測支原體只需幾個小時,是快但也是不靈敏的支原體檢測方法。該方法采用針對支原體DNA的引物用PCR檢測可疑樣本,其中PCR引物通常針對支原體的16S rRNA基因。在凝膠電泳過程中,支原體DNA會顯示為特異性條帶,以此指示支原體的存在。PCR法可以檢測大多數支原體,但謹慎起見好同時使用另一種檢測方法來進行驗證。

酶學檢測和ELISA

此外,也還存在一些其他支原體檢測方法。例如酶學檢測是將可疑樣本添加到特定底物中,在這一體系內支原體的酶可以將ADP轉化為ATP,隨后能利用ATP發光的luciferase酶就可以指示支原體的存在。ELISA也能用于支原體檢測,以ELISA法為基礎的支原體檢測一般使用針對支原體16S rRNA基因的帶標記探針或抗體,來檢測培養物中是否含有支原體。

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