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細胞培養(yǎng)支原體污染問題解決方案

1、Q:  支原體污染對細胞有什么危害?
A:  支原體污染后,不會使細胞死亡可以與細胞長期共存,培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁,細 胞無明顯變化,外觀上給人以正常感覺,實則細胞收到多方面潛在影響,如引起細胞變形, 影響 DNA 合成,抑制細胞生長等,以致影響實驗數(shù)據(jù)的可信度。
2、Q:  支原體污染有什么特征?
A: 細胞狀態(tài)變差,生長變慢,在顯微鏡下觀察可能會有小黑點,但培養(yǎng)基一般不發(fā)生 渾濁。細胞傳代以后就出現(xiàn)細胞間黑點,細胞空泡化,很多類似凋亡、壞死的細胞,終細胞漂浮,*死亡。


3、Q:  細胞培養(yǎng)時,顯微鏡下的小黑點是什么?
A: 支原體污染后,細胞凋亡壞死,釋放出大量碎片,看起來就像小黑蟲子。
4、Q:  細胞通過何種途徑感染支原體?
A: 支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染(某些支原體在人體是正常菌群如口腔中的支原體)、培養(yǎng)基的污染、被污染細胞造成的交叉污染、實驗器材的污染、制備細胞的原始組織或器官的污染等等,由于支原體大小為 0.1~0.8 um,無細 胞壁,可透過一般過濾膜(0.22-0.45 um),血清中也可能含有支原體。
5、Q:  支原體污染如何檢測?
A:  利用支原體具特殊專一性之 primers,經(jīng)由 PCR 反應來復制支原體 DNA。所用 primers 來自支原體的 conserved 16S-23S rRNA 序列,由于此段序列依支原體種類不同而不同, 因此可依所復制之 DNA大小及其 restriction fragment 大小差異來作偵測與鑒定支原體。


6、Q:  如何清除支原體
A:  由于市場同類產(chǎn)品都為抗生素類,對細胞本身也會產(chǎn)生一定影響,而且有反復發(fā) 作的風險,吉銳生物推出的 MycoplasmaOUT?Treatment,活性成分為抗菌肽,經(jīng)多方測試表明對大部分細胞無毒害作用,因其*的作用原理,支原體不會對其產(chǎn)生耐藥性,并且其作用時間短,在三天內(nèi)就可殺滅支原體,并自動降解成氨基酸,不會對細胞造成二次污染


7、Q:  為什么在培養(yǎng)細胞前要加入MycoplasmaOUT? Prevention?
A:由于支原體污染后能夠進入細胞,而MycoplasmaOUT? Prevention不能夠進入細胞內(nèi)也就不能殺滅已經(jīng)進入細胞的支原體,而這部分細胞死亡時會釋放其內(nèi)部的支原體,需要MycoplasmaOUT?Prevention來殺滅新釋放出的支原體,以防止新生細胞受到污染。
8、Q:  所謂的黑膠蟲污染
A:
上述現(xiàn)象很像所謂的“黑膠蟲"。我感覺實際是支原體感染以后細胞生長不好造成的碎片和感染原蟲(現(xiàn)在看來是些胞外囊泡)的混合體。這種現(xiàn)象的直接原因是支原體等原蟲感染,間接表象是小黑點,被誤傳為“黑膠蟲"。
光鏡下看不到支原體,但是可以看到支原體感染的終末現(xiàn)象——細胞凋亡壞死,釋放出大量碎片,看起來就像小黑蟲子。
查找類似的帖子——很多人是更換血清后出現(xiàn)這種問題;
說空氣傳播的可能是一個培養(yǎng)箱的人都用了同一種血清,而不是可以通過培養(yǎng)箱空氣傳播;感染可能是牛源性的支原體,通過產(chǎn)道或血行感染。
所謂“細胞生長不受影響",其實是污染的嚴重程度不高而已;
支原體污染嚴重就出現(xiàn)細胞大量空泡形成,細胞間空曠地帶出現(xiàn)大量黑點,細胞終凋亡、壞死,漂起來。有些國產(chǎn)血清寫著建議滅活,其實是掛羊頭賣狗肉,那個56度30分鐘更多的是為了殺殺支原體的。實際上還有很多殺不死的。但可以降低產(chǎn)品支原體等微生物污染風險。用抗生素殺支原體,小黑點可以得到抑制,不過我想*就很難了,而且處理時間很長,少一個星期。
抗生素可以抑制細菌細胞壁及蛋白合成,支原體沒有細胞壁,而且對細胞生長有一定影響,所以不建議用抗生素殺支原體。
抗菌肽產(chǎn)品殺支原體,是利用物理的方式,支原體和細菌表面帶有正電荷,我們的抗菌肽表面帶有負電荷,通過電荷間的引力作用,抗菌肽和支原體特異性結(jié)合,通過細胞膜的融合作用,可以在支原體表面類似打孔的方式,使得支原體裂解死亡。

摘自小木蟲網(wǎng),作者:小刀188


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