選擇合適的重組蛋白產(chǎn)品，對你得到正確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果關(guān)重要，可從以下幾點(diǎn)進(jìn)行選擇：
1、蛋白來源
對于一些蛋白，需要進(jìn)行一系列的翻譯后修飾才能成為具有活性的成熟蛋白。細(xì)菌不能提供這樣的修飾，而哺乳動物細(xì)胞可以。因此，選購時應(yīng)注意蛋白的來源。例如，novaprotein的人IL-4是在E. coli中制備的，金斯瑞的人IL-4是在哺乳動物CHO細(xì)胞中制備的。
當(dāng)然除了上面提到的兩種表達(dá)系統(tǒng)外，還有酵母和昆蟲表達(dá)系統(tǒng)，四種系統(tǒng)各有優(yōu)劣，選重組蛋白是一定要注意。
表達(dá) | 細(xì)胞 | 優(yōu)點(diǎn) | 缺點(diǎn) |
原核 | E.coli | 繁殖快、成本低、產(chǎn)量高；遺傳背景及基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制清楚；易于大規(guī)模培養(yǎng)，成本低廉 | 蛋白常為包涵體，純化困難；無糖基化（分泌蛋白，細(xì)胞膜上蛋白不可用），生物活性不定；無翻譯后修飾，內(nèi)毒素含量高 |
酵母 | Pichia | 使用簡單，表達(dá)量高，His-tag便于純化，一定的翻譯后加工可進(jìn)行糖基化修飾，操作簡單，適合大規(guī)模生產(chǎn)；可誘導(dǎo)表達(dá)，也可分泌表達(dá)，產(chǎn)物便于純化 | 有時會出現(xiàn)蛋白切割問題；糖基化不能滿足要求 |
昆蟲 | High-5 | 產(chǎn)量高，翻譯后加工與哺乳動物相似；對于部分有毒性或較難表達(dá)蛋白有優(yōu)勢；無內(nèi)毒素污染 | 蛋白活性不如哺乳動物；適合表達(dá)激酶等定位于細(xì)胞內(nèi)的真核蛋白 |
哺乳 | CHO; HEK293 | 完善的翻譯后加工，活性接近天然蛋白 | 周期長、技術(shù)要求高；表達(dá)產(chǎn)量低 |
2、種屬來源
蛋白的種屬來源常見的有人源、小鼠源和大鼠源等。一般來說，不同種屬之間的蛋白同源性在80%以上就可視為有交叉活性，可推薦使用。
3、生物活性和穩(wěn)定性
蛋白的純度、內(nèi)毒素水平和批次間穩(wěn)定性等直接會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，因此，高品質(zhì)的蛋白產(chǎn)品會嚴(yán)格監(jiān)控這一環(huán)節(jié)，并且提供詳細(xì)數(shù)據(jù)。同時，在選擇蛋白產(chǎn)品時還需考慮其生物活性。
一般記得以下五點(diǎn)就行：
· 大多數(shù)人類細(xì)胞因子對小鼠細(xì)胞都有活性。
· 許多小鼠細(xì)胞因子對人類細(xì)胞也有活性，但比相應(yīng)人類細(xì)胞因子活性低。
· 一些人類的細(xì)胞因子（如IL-7）在小鼠細(xì)胞中表現(xiàn)出比小鼠細(xì)胞因子更高的活性。
· 干擾素、GM-CSF、IL-3 和IL-4 有物種特異性，對于非人類細(xì)胞幾乎沒有活性。
· 成纖維細(xì)胞生長因子和神經(jīng)營養(yǎng)因子是高度保守的，在其它的動物細(xì)胞中也能表現(xiàn)很好的活性。
4、蛋白形式
通常有兩種形式：含牛血清白蛋白BSA或不含BSA，不含BSA一般用“CF"表示。加入BSA可以提高蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，增加了貯存期限。含BSA的蛋白可以作為細(xì)胞組織培養(yǎng)物或者ELISA實(shí)驗(yàn)中的理想標(biāo)準(zhǔn)品，而CF形式的蛋白尤其適用于活體實(shí)驗(yàn)。以R&D systems的Human IL?4為例，就有兩種形式，買之前要先明確自己用來做什么實(shí)驗(yàn)的。
5、查閱文獻(xiàn)
這個是快捷的方法，怎么去查文獻(xiàn)是我們必須要掌握的技能。
雖有萬般方法，但是只要你會查閱文獻(xiàn)，則萬事皆定。
如果喜歡這篇文章，記得分享哦！
版權(quán)所有 ICP備案號: 管理登陸 技術(shù)支持：化工儀器網(wǎng) 總流量：836121 網(wǎng)站地圖
